人乳頭瘤病毒16（HPV-16）PCR試劑盒

產(chǎn)品名稱(chēng)：人乳頭瘤病毒16（HPV-16）PCR試劑盒

英文名稱(chēng)：Human Papillomavirus 16 (HPV-16) PCR Kit

人乳頭瘤病毒是一種屬于乳多空病毒科的乳頭瘤空泡病毒 A 屬，是球形DNA病毒，能引起人體皮膚黏膜的鱗狀上皮增殖。表現(xiàn)為尋常疣、生殖器疣（尖銳濕疣）等癥狀。 隨著性病中尖銳濕疣的發(fā)病率急速上升和宮頸癌、肛men癌等的增多，人乳頭瘤病毒（hpv）感染越來(lái)越引起人們的關(guān)注。HPV16 是高危型病毒，有宮頸癌傾向，是癌前病變。因此快速檢測(cè)人乳頭瘤病毒 16 具有重要意義。本產(chǎn)品就是為此目的根據(jù) PCR 原理開(kāi)發(fā)的試劑盒，它具有下列特點(diǎn)：

1.    即開(kāi)即用，用戶(hù)只需要提供 DNA 模板。

2.    引物經(jīng)過(guò)精心優(yōu)化，專(zhuān)一性強(qiáng)，只擴(kuò)增人乳頭瘤病毒 16 ，與其他病原沒(méi)有交叉反應(yīng)。

3.    提供陽(yáng)性對(duì)照，便于區(qū)分假陰性樣品。

4.    PCR mix 中含上樣染料，PCR 后可以直接上樣電泳。

5.    本試劑盒足夠做 40μL 體系的 PCR 50 次，但只能用于科研。

【試劑組成】

【自備試劑】樣品RNA。

【注意事項(xiàng)】

一、樣品 DNA 的制備

1.    用自選方法純化 N+2 個(gè)樣品的 DNA，本試劑盒跟市場(chǎng)上大多數(shù)核酸/提取試劑盒兼容。

2.    如果有 N 個(gè)樣品，則需要做 N+2 個(gè)提取，包括一個(gè)樣品制備陽(yáng)性對(duì)照和一個(gè)樣品制備陰性對(duì)照。樣品制備陽(yáng)性對(duì)照是在適量水（取決于試劑盒要求的樣品起始量）中加 10μL 人乳頭瘤病毒16 PCR 陽(yáng)性對(duì)照而得，樣品制備陰性對(duì)照是直接用水。提取結(jié)束后最后得到模板DNA放冰上待用。

二、設(shè)置 PCR 反應(yīng)（20μL 體系）

3.    對(duì) N+2 個(gè)樣品，在 PCR 時(shí)需要增加一個(gè) PCR 陽(yáng)性對(duì)照和一個(gè) PCR 陰性對(duì)照，故需要設(shè)置 N+4 個(gè)反應(yīng)。在 N+4 個(gè)PCR 管中分別加入下列成分

4.    按下表設(shè)置 PCR 反應(yīng)：

三、電泳檢測(cè)

5.    取 5-10 μL 擴(kuò)增產(chǎn)物就行常規(guī)瓊脂糖電泳，檢測(cè)擴(kuò)增效果，由于擴(kuò)增產(chǎn)物較短，建議用1.5%-2.0%的瓊脂糖凝膠。

6.    陽(yáng)性樣品預(yù)期得到的擴(kuò)增產(chǎn)物長(zhǎng)度為200bp左右。如果兩個(gè)陰性對(duì)照有此擴(kuò)增產(chǎn)物，說(shuō)明環(huán)境污染，則整個(gè)實(shí)驗(yàn)無(wú)效，不需要分析實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

7.    如果所有樣品和PCR陽(yáng)性對(duì)照均無(wú)此擴(kuò)增產(chǎn)物，則說(shuō)明有系統(tǒng)性的問(wèn)題（試劑、設(shè)備、程序、操作等），需要重復(fù)并排查原因。

8.    如果沒(méi)有上述兩種情況，則實(shí)驗(yàn)有效，可以分析樣品的擴(kuò)增結(jié)果。N+2個(gè)樣品中有擴(kuò)增產(chǎn)物的判定為陽(yáng)性，無(wú)則判定為陰性。